生化分析仪常识

2016-05-06 09:58:15 72

下面的内容以奥林巴斯生化分析仪为例,其他品牌生化分析仪仅供参考。



( 1 )问题:工作结束之后不能再次开始工作或正常关机。



原因:最常见的原因是打印机处于实时打印状态( Data Log List 或 Realtime Report 状态),打印机可能缺纸、卡纸、被误操作为暂停或关机等。

解决方法:排除打印机故障,点击 < 仪器状态 >< ( 6 ) DPR 状态 > ,点击 ,按 Resume 继续打印,按 Cancel 取消打印操作。

 

( 2 )问题:是否每天定标就能保证结果稳定?



答:不一定,可能您在定标时并不是每天都新溶解定标液,因为定标液复溶后有一些项目不稳定,比如: TBIL 、 DBIL (见光分解)、 GLU (细菌分解)、酶项目(冰冻后复溶降解)。

解决方法:以上项目在定标时一定要新溶解一瓶定标液,至少溶解三十分钟,在一小时内测定完成。

 

( 3 )问题:病人输液时加入右旋糖苷影响总蛋白的结果吗?



答:影响。右旋糖苷存在血清中可引起轻度乳糜,双缩脲法测定总蛋白会使右旋糖苷形成沉淀及绿色化合物而导致错误的结果,偏高的结果最多可以达到 20 克 / 升。

 

( 4 )问题:可以用总蛋白试剂测定尿或脑脊液中的蛋白吗?



答:不能。因为敏感度太低。应选用 OSR6170 (尿 / 脑脊液蛋白试剂盒)。

 

( 5 )问题:奥林巴斯水平 I 和水平 II 质控血清可以用在干化学的仪器上吗?



答:不能。常规的质控血清在奥林巴斯仪器上测定时被试剂稀释,而干化学的质控系统质控液直接加到干片上。相对于常规质控,干化学质控中的保护剂、添加剂、稳定剂的浓度相对较高。实际上,没有任何一种质控同时适用于干化学与湿化学。

 

( 6 )问题:可以用 CKMB 试剂盒测定 CKBB 吗?



答:理论上可以,但提供的标本中必须不含有 CKMB ,这些可以用电泳法来检查。

 

( 7 )问题: OSR6121 的葡萄糖试剂可以测定 CSF (脑脊液)中的葡萄糖吗?



答:可以,因为与尿标本一样,都,都不含有蛋白质,但是前没有官方报道。



( 8 )问题:如何防止 ALT 对 LDH 的交叉污染?



答:在 ALT 试剂中加入终浓度为 5mmol/L 的 EDTA ,可以降低约 50% 的交叉污染(可降低至 14U/L 的 LDH )。

 

( 9 )问题: EDTA 血浆影响苦味酸法的肌酐吗?



答:影响。 EDTA 抑制肌酐与苦味酸反应,使结果偏低。

 

( 10 )问题:高葡萄糖的标本影响苦味酸法的肌酐吗?



答:苦味酸与肌反应不特异,假肌酐如:酮体、抗坏血酸盐、丙酮酸盐、葡萄糖和尿酸都对 Jaffe 氏反应有明显的扰作用。通过调整 NaOH 与苦味酸的浓度,调节反应温度与测量窗口,可以减低这些竟争反应,奥林巴斯改良的 Jaffe 法可以做到葡萄糖浓度达到 17mmol/L 没有干扰。

 

( 11 )问题:奥林巴斯 DBIL 直接胆红素试剂所测定结果是否包含△胆红素?



答:是。因为奥林巴斯 DBIL 直接胆红素试剂带有样品空白,可以扣除△胆红素的干扰。所以有用户说结果太低,不是太低,是其它试剂的结果太高了。

 

( 12 )问题:为什么 TP 总蛋白的试剂空白为负数?



答:在测定试剂空白时,因为当试剂 II 加入后,在副波长 660nm 的吸光度大于主波长 540nm 的吸光度。用双波长测定,试剂空白为负数。

 

( 13 )问题:为什么有些质控 CKMB 结果大于 CK ?



答:因为质控中有一些添加成份,可能动物组织(牛脑),此组织中含有 CKBB ,所以 CKMB 的结果大于 CK ,但不应大于 CK的二倍。

 

( 14 )问题: APOA1/APOB 是依照 IFCC 还是 CDC 标准追踪的?



答:中国是最早是由卫生部老年病研究所根据美国疾病控制中心 CDC 引进的此项目,美国 CDC 的结果比国际卫生组织 WHO 低, APOA1 乘以 0.91 , APOB 乘以 0.79 就与国内一致。一般欧州公司的产品都是 IFCC 标准的。

 

( 15 )问题:葡萄试剂可以测定尿标本吗?



答:可以。建议用已糖激酶法的葡萄糖试剂。葡萄糖氧化酶法的试剂会受尿中 Vc 的干扰。

 

( 16 )问题:为什么有时 HBDH 的结果大于 LDH ? LDH opt 与 LDH IFCC 有什么关系?



答:从某种意义上讲, HBDH 是 LDH 的一部分,但是可能由于方法学(底物、缓冲液、 PH 值等)的不同,会出现 HBDH 的结果大于 LDH ,如果 LDH 是 opt 法就没有这种现象。 LDH opt 是欧洲的方法,底物是丙酮酸。 LDH IFCC 的底物是乳酸,两者的正常值范围相比 LDH opt 比 LDH IFCC 大约高 2.2 倍。

 

( 17 )问题:新换了一个试剂,有反应曲线、因数是正确的、方法学、读点、波长均无问题,结果是“ 0 ”,为什么?



答:在参数中 Correction Factor A 常规下是: 1.0000 ,不小心被改为了 0 。

 

( 18 )问题:新换了一个厂家的肌酐试剂,重新定标后,结果均为 1500 多,是何种原因?



答:在参数中 Correction Factor B 常规下是: 0.0000 ,不小心被改为了 1500 。

 

( 19 )问题:经常丢试剂,但仅限某一项目,原因是什么



答:最常见的原因是您没有使用原厂的试剂瓶,国产的试剂瓶的形状可能不规则,在取试剂的过程中试剂针碰到试剂瓶的瓶口,就会报警设有试剂。

 

( 20 )问题:给一新项目定标时,报警 ACAL incomplete ,为什么?



答:最可能的有以下几种原因:

① 定标液的位置不正确;

② 定标液所用的样品杯太小、太低,不能被仪器探测到(比如有些用户用离心管);

③ 试剂量不足,试剂 I 或试剂 II 任何一瓶试剂小于 2ml (旧版)或低于报警测试数目(新版);

④ 没有定标申请而放入空白(蓝)和 / 或定标(黄)架子。

 

( 21 )问题:新上了一个实验项目,定标不通过,报 Calibration Error ,是什么原因?



答:在定标过种中如果有任何报警,将会定标失败:

① 在定标过程中定标液不足;( # )

② Rate 法的项目线性不好或范围设置不正确;( * )

③ 试剂空白超出所设定的范围或波长设定错误;( Y 、 y 、 U 、 u )

④ 在 P-B-I 定标参数中,因数范围过窄,先报 Calibration Factor Over Range ,后报 Calibration Error 。

 

( 22 )问题:如果测定的标本特别多,如何给一个项目设定多瓶试剂?



答:奥林巴斯的生化分析仪最多可以给一个项目设定九瓶试剂:点击 < 仪器状态 >

< ( 0 )试剂状态 > ,先设一瓶试剂,再用光标选定一个空位置,点 后,选定项目、瓶子的规格,退出后,最后设定的为第一瓶试剂,以前的为第二瓶试剂,依此类推。

 

( 23 )问题:经常发现某一种试剂用的特别快,比如早上检查有 100 个 TP 试剂,做四、五十个肝功后仪器就报警没有试剂了,可能是什么原因?



答:在 P-Y-A 中,最下面是 LIH Reagent Test Name :您一定是选定的此项目,它的意义是, LIH 的测定与此项目共用一瓶试剂,但这个地方的误选,仪器不会了生错误而吸此项目的试剂,在另外一个画面 P-Y-C ( Round )中, LIH Measure :中默认是“ Selected ”,被不小心改成了“ ALL ”,也就是说您让仪器每个标本都做 LIH (血清信息),用的是您所选定的试剂。

 

( 24 )问题:如何设定奥林巴斯带样品空白的 TBIL/DBIL ?



答:按以下六步设定实验参数:

1 . 首先,在 [Parameter]-[Common Test Parameter]-[Test Name] 编 TBIL 与 DBIL 的实验名称,然后在 91 号与 92 号编 TBILb 与 DBILb (总胆红素与直接胆红素的空白实验)

2 .其次,在 [Parameter]-[Specific Test Parameter] 中,编辑 TBIL 与 91TBILb 的参数(详见试剂盒内的说明书), DBIL 与 92DBILb 的参数。请注意 TBIL 与 91TBILb 的参数要完全一样, DBIL 与 92DBILb 的参数要完全一样。

3 . [Parameter]-[Inter-Related Tests]-[Sample Blank] 中,选 Color Test (颜色实验)为 TBIL 与 DBIL , Blank Test[ 空白实验 ] 为 91TBILb 与 DBILb 。

4 . [Parameter]-[Calibration]-[Calibration Specific] 中,选 TBIL 与 DBIL 为 AB 定标方式, 91TBILb 与 92DBILb 为 MB 定标方式, Factor 为 1.0000 。

5 .设试剂位: TBIL/DBIL 为红盖, TBILb/DBILb 为白盖,共设定了四个试剂位。

6 . [User]-[Calibration] 中, TBIL 与 DBIL 两点定标, TBILb 与 DBILb 空白定标。

 

( 25 )问题:新设定一个计算实验后,仪器不能正常工作,在退出时显示“ LIH Reagent Test No./Calculated Test No. Miss Match ” , 是何原因?

 

答: 在 P-Y-A 中,最下面是 LIH Reagent Test Name :您一定是选定的此项目,这个地方的默认为 96 : LIH 。

 

( 26 )问题: 新设定一个计算实验后,仪器不能正常工作,在退出时显示“ Total Sample:Item ” , 是何原因?

 

答:在 P-I 中, SV (标本量) +DIL VOL (吐水量) +R1 (试剂 I ) +DIL VOL (吐水量) +R2 (试剂 II ) +DIL VOL (吐水量);在 AU400/600/640 应在 150-550 微升之间,在 AU2700/5400 应在 120-440 微升之间。

 

( 27 ) 问题: 新设定一个计算实验后,仪器不能正常工作,在退出时显示“ R1+Dilution Volume:Item ” , 是何原因?

 

答:在 P-I 中, R1 (试剂 I ) +DIL VOL (吐水量)在 AU400/600/640 应小于 300 微升, AU2700/5400 应小于 250 微升。

 

( 28 ) 问题: 新设定一个计算实验后,仪器不能正常工作,在退出时显示“ Number of Muti:Item ” , 是何原因?



答:在 P-Q-I 的质控参数编辑中,一个项目只能有两个“ Muti ”,表示用这两个项目画二维质控图( Twin Plot ),多了或者少了仪器都不能正常工作。

 

( 29 ) 血清磷的测定有时偏高 1 倍以上,复查结果正常,为什么?



答:交叉污染,例如仪器试剂针加完含磷酸盐的试剂( BG ),再加磷试剂,当冲洗不完全时造成污染。解决方法: A. 调整试验顺序,把磷项目放在前面,先测定即可避免污染. B. 利用仪器本身提供的抗交叉污染程序,通过增加冲洗次数可避免污染 。

 

( 30 )溶血、黄疸、乳糜血对临床生化的那些项目有干扰?



答:溶血、黄疸、乳糜对临床项目的干扰见以下表格(本结果仅供参考)

 

( 31 )测定结果后面有时出现标志 “ u “ , 是什么原因?



答:试剂空白的吸光度超出设定范围。

解决方法: A 如为试剂变质,则更换试剂; B 重新调整试剂空白的吸光度范围; C 如更换灯泡或做过保养,重新做杯空白 (PHOTOCAL) 。

 

( 32 )怎么样判断 K , Na, Cl 电极膜破裂?



答:如果电极膜破裂,在 ISE 诊断中测定高值标准,底值标准和 MID 的电位值,如果三者电位值一致,没有明显区别。

 

( 33 ) TG 测定时,质控高、低值都符合要求,病人结果偏低,为什么?



答:可能的原因是用户所用定标液为甘油(无色水剂),试剂中的关键酶(脂肪酶)量不足或者活性中够,就会造成这种现象。

 

( 34 ) ISE 定标时, SLOPE 值突然下降 10 点以上,为什么?



答: Na,K,Cl Slope 值从 53 , 55 , 52 突然下降为 34,38,40. 常见原因: A. 定标液敞口放置时间过长,更换新定标液。 B. 清洗混匀棒。 C. 更换三通管。

 

( 35 )如何在 AU400/600/640 仪器实验自动重做?



答: ⑴ .[Parameter]-[System]-[System] 中: Routine Test Requsition 由 Sequential—Rack No; Auto/Standard Repeat: 由 Stanard → Auto 。

⑵ 在 Online 参数中: 改成 Batch-None-Batch-None 。

⑶ 报警限确定(仅供参考):见表 1 。

⑷ 重做规则以及相关实验: [Parameter]-[Repeat Parameter]-[Repeat Common] 中设置:

Repeat Normal or Mode: # ; ? ; * ; ! ; G ; P ; T

Dilution or Mode: @ ; $ ; D ; B ; & ; Z ; F

相关试验: ALB—TP ; DBIL—TBIL ; CKMB—CK ; TG—LDL 。

 

( 36 )为什么要定标?多长时间要定标一次?



答: ⑴ 定标的意义: 定标就是要找出一个参考点,就是一个 K 值(或 F 值)。它是由仪器与试剂状态确定下来的。当我们测定一个标本时,无论您是用手工的方法或全自动生化分析仪,测出来的值只是一个吸光度,这个吸光度对我们没有什么意义,我们要把这个吸光度转换成一个浓度或是酶的活性。那就要乘上一个 K 值,计算并打印出来的结果对我们就有意义了。 K 值就是我们通过定标找出来的。一般上最低要求是有试剂空白与标准品。经过仪器测定出两个吸光度:

标准浓度 - 试剂空白

A 标准 - A 试剂空白 (试剂空白通常是 0 )

标准液的浓度我们是知道的,这两个吸光度可以由仪器测出,这样就得出一个 K 值。无论什么样的标本,用其吸光度乘以 K 值我们就得到了答案。因此, K 值具有非常决定性的意义,可以决定标本的准确性。

⑵ K 值的决定因素: 我们看看 K 值会受到什么影响呢?第一,标准液的浓度一定要准确(标准液最好与标本一样是以血清为基质的)。第二,标准液的吸光度与试剂空白的吸光度一定要准确。吸光度受仪器状况、试剂状况的影响,如果您的仪器相当稳定,试剂是影响 K 值的一个主要因素。

⑶ 如何确定 K 值是正确的? 一般我们用质控血清来检查,最好是两种水平的质控来检查,如果质控结果很好,可以说 K 值是准确的,用这个 K 值计算出来病人的结果也是准确的,所以 K 值非常关键。

⑷ K 值的真面目: K 值实际上代表了斜率,截距代表试剂空白,试剂空白每天都在变化,所以 K 值的稳定性决定您的仪器与试剂,如果仪器与试剂都十分稳定,那 K 值也很稳定。

⑸ 多长时间定一次标合适? 这要看您试剂的稳定性,质控结果不好,有些项目做试剂空白可以解决,有些项目要做两点定标。

⑹ 酶的项目如何确定 K 值:一是计算出来的理论 K 值;

TV ′ 1000

K= ————————

SV ′ L ′ e

二是用有酶项目的定标液得出 K 值: 目前 OLYMPUS 公司可以提供多项目的定标液,不仅有底物类的项目,也有酶类的项目。

 

( 37 ) AU400/600/640 在编参数时有哪几项基本点?



答: Sample vol (样品量) : 2 ~ 50 m l , 可以按 0.5 m l 为单位增减。 Dil vol. ( 稀释液 - 吐水量 ) :一般建议样品量少于 5 m l 时,加 10 m l 水。

Reagent 1 vol (第一试剂量) : 25 -300 m l, 可以按 1 m l 为单位增减。 Dil vol( 稀释液 - 吐水量 ) :一般用浓缩试剂时才用。

Reagent 2 vol (第二试剂量) : 25 -300 m l, 可以按 1 m l 为单位增减。 Dil vol( 稀释液 - 吐水量 ) :一般用浓缩试剂时才用。第二试剂是固定的 10-11 点之间加入的。

Wavelength Pri: (主波长) Sec. (付波长)

测定波长共有十三种可以选择: 340,380,410,450,520,540,570,600,660,700,750, 800nm 。

Method (方法学) 共六种 : End,Rate,Fixed;End1,Rate1,Fixed1 。

前三种与后三种的差别为:前三种是以试剂为空白的,后三种是以比色杯为空白的。

Reaction (反应方向) : + , - 。 End 与 Fixed 法不起作用,但是 Rate 法一定要输正确。

请记住!向下反应一般来说只有三种: AST 、 ALT 、 HBDH, 其它均为向上反应。

Point 1 Fst Lst

Point 2 Fst Lst 

(读点设置) Point1 为主测定, Point2 为辅助测定。

End 法: a )单试剂:一般均为 0--27 ,特例: ALB 为 0—4 ;

b )双试剂(有样品空白功能): 0—27 ; 0—10 。

Rate 法: a )单试剂:延迟时间较短的,一般输 4—10 。

b) 延迟时间较长的,一般输 21—27 。

Fixed 法:固定两个点之间去计算。

a) 单试剂苦味酸法肌酐: 1—4 ;尿素氮: 3—8 。

b) 双试剂苦味酸法肌酐: 11—14 ;尿素氮: 12—17 。

Linearity (线性) : Fst Lst Rate 法才输入,一般国产试剂 30% ;进口试剂: 15% 。

No-Lag-Time : Rate 法才输入,在读点期内,如果反应太快,超过线性( Linearity 限)仪器会自动用线性比较好的那一段来计算。

Min OD L Max OD H (吸光度限)

Rate 法才输入,如果 Rate 法的反应,反应速度太快,出现了底物耗尽的情况,向下的反应会低于 Min OD ,向上的反应会超过 Max OD 。

Reagent OD Limit Fst. L Fst. H

Lst. L Lst H

试剂空白 OD 限 : Fst 指的是 0 点, Lst 指的是 27 点。只对 Rate 法有用,一般向下的反应,输 0.9—2.5 ,向上的反应 -2.0—0.8 。

Dynamic Range L H : 指的是试剂盒的线性范围。

ONBOARD STBLTY PERIOD 有条码的试剂在仪器上的稳定期。

Normal Range (正常范围) : 可以按姓别、年龄输入正常范围

None selected (不分性别年龄的正常值) 如果什么都没有选择时的正常范围 ( AU600 在这里输入几位小数,结果就保留几位小数)

Out of Range 超出范围

Panic Value 报警值

Unit 单位

F7 : Decimal Places 小数位

 

( 38 ) Olympus 生化分析仪可以做前带检查吗?



答:可以,并且有三种检查方式,详见 [Parameter]-[Special]-[Datacheck Parameter] 。 Olympus 的 TG 试剂就有第一种检查法。

 

( 39 ) CKMB ﹥ CK 会出现在什么情况?



答: 国内及国外的很多报道有上述现象 , 只要 CKMB 的升高不是由于溶血造成的 ,CKMB >CK, 这样的病例 95% 是 O 型或 B 型血的癌症患者 , 原因是部分癌症病人免疫系统混乱, 其中的一些免疫球蛋白充当的辅酶的作用。

 

( 40 )溶血标本可测定 CKMB 吗?



答:通常测定 CKMB 的标本应避免溶血,在 Olympus 的试剂与仪器配合可以基本上扣除这种干扰。

RBC 中并不含有 CKMB, 但 RBC 中含有 ADK, 一般厂家会在试剂中加入抑制剂 (5 磷 酸二腺酐 AP 5A ) 来抑制 ADK 的作用 , 但抑制率仅有 95-97%, 也就是说有 3-5% 没有被抑制 , 对于 正常的标本只升高 0-6U/L, 极端标本可能会到 35U/L, 只要应用双速率法 , 就可以扣除 ADK 的 干扰。

 

( 41 ) CKMB 正常, CK 特别高可能会出现在什么情况的病人?



答:溶血标本、肌肉损伤、外科手术后、酒精中毒、肌营养不良等。

 

( 42 ) OlympusCKMB 试剂中抗 M 亚基抗体的特异性如何?



答:在 37 ℃ 下最多可以达到 4000U/L, 特异性为 99.5%, 最多可有 20U/L 的干扰。

 

( 43 ) Olympus 质控或定标液中应选哪种方法的靶值?



答:以下的表格为 Olymopus 定标液及质控血清中国建议使用的方法。

 

( 44 )标本的某一项或几项的结果是零或负数,复查后正常,其它标本的结果和质控结果均正常,可能是什么原因?



答:最常见的原因是血清表面有气泡。

 

( 45 )在酶项目分析中“ Serum Start ” ( 血清启动 ) “ Substrate Start ” ( 底物启动 ) 有什么区别?



答:通常血清启动为单试剂,加完标本就开始反应,底物启动一般为双试剂,标本与第一试剂没有反应,加完启动试剂(第二试剂)开始反应。

 

( 46 )如何判断生化仪配套纯水的质量?



答:此方法不一定科学,仅供参考: 取一只一次性的塑料试管,加一毫升左右的镁(二甲苯胺兰法)试剂,然后加一两滴水,5 分钟后观察有无变成红色,如变成红色表明所用的水中含有离子。

 

( 47 )如何排除仪器方面的问题?



答 : ( a ) 光路 : 在仪器上设定一个项目为终点法 , 因数为 10000 给这个项目做空白定标 . 然后 , 把样品和试剂全部放成生化仪配套纯水 , 观察最后的结果 , 可以接受的范围是正负 15.

(b) 比色杯 : 奥林巴斯的仪器是做光电校正 , 日立仪器是做比色杯空白 , 不同的仪器有不同的标准 Ca,Mg 等项目对比色杯敏感。

 

( 48 )甘油三酯会发生类似免疫反应的前带现象吗?



答:会发生。甘油三酯的催化反应主要是基于 L- 甘油 -3 磷酸氧化酶与改良的 Trinder\''s 反应。当 TG 大于 20mmol/L 时会有一个十分强烈的干扰反应,并经常发生在一些轻微乳糜的标本。产生干扰的原因是快速利用氧,反应处于厌氧状态, L- 甘油 -3 磷酸氧化酶与其电子受体作用使形成的颜色消退。

 

( 49 )如何判断试剂针与搅拌棒的交叉污染?



答:以 AU400/600/640/2700 为例,这些仪器都是三头搅拌棒: Px 为提供项目, Ra 为接受项目,做 20 个标本(混合血清),每个标本只做一个项目,按如下排列方式做:

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Px1 Ra1 Ra2 Ra3 Ra4 Px2 Ra5 Ra6 Ra7 Ra8

样品针: Data1 REF.1 Data2 REF.2

搅拌棒: Data1 REF.1 Data2 REF.2

以同样的方式做下一组标本,得到 Data3 、 Data4 、 REF3 、 REF4 。用以下方式研究:

100- (( Data1/REF.1 ) *100 )

100- (( Data2/REF.2 ) *100 )

100- (( Data3/REF.3 ) *100 )

100- (( Data4/REF.4 ) *100 )

 

( 50 )如何判断比色杯的交叉污染?



答: P 为提供项目, R 为接受项目,所有标本均为混合血清。以 AU400 为例 88 个比色杯要准备 176 份标本:

P1 P2 P3………P20 P21 22(Water) P23 P24………P42 P43 44(Water)

以此类推,第 66 与第 88 个标本的项目均为生化分析仪配套纯水。在同一个 ROUND 从第 89 到 176 个标本的项

目均 R 项目,后 88 个标本均为血清,不放水。那么第 110 、 132 、 154 、 176 号标本的结果为

参照结果( REF )从第 89 号到 176 号除外以上四个号码的标本均为受到比色杯干扰的结果。

以上的操作再重复一次。

公式: 100- ((受干扰结果的平均值 / 四个对照结果的平均值) *100 )

 


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